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常見培養(yǎng)基的操作方法和注意事項(xiàng):
加水:
打開滅菌鍋蓋,向鍋內(nèi)加水到水位線。立式消毒鍋用已煮開過(guò)的水,以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。注意水要加夠,防止滅菌過(guò)程中干鍋。裝料、加蓋滅菌材料放好后,關(guān)閉滅菌器蓋,采用對(duì)角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,使蒸汽鍋密閉,勿使漏氣。
排氣:
打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí),維持5min,使鍋內(nèi)冷空氣*排凈。
升壓、保壓和降壓:
當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí),即可關(guān)閉排氣閥,壓力開始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí),控制電壓以維持恒溫,并開始計(jì)算滅菌時(shí)間,待時(shí)間達(dá)到要求(一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃,20min)后,停止加熱,待壓力降至接近“0”時(shí),打開放氣閥。注意不能過(guò)早過(guò)急地排氣,否則會(huì)由于瓶?jī)?nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶?jī)?nèi)液體沖出容器之外。
滅菌后的培養(yǎng)基空白培養(yǎng):
滅菌后的培養(yǎng)基放于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),經(jīng)24h培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng),可保存?zhèn)溆?斜面培養(yǎng)基取出后,立即擺成斜面后空白培養(yǎng);半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后,空白培養(yǎng)。
干熱滅菌法:
通過(guò)使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后,放入電烘箱中烘烤,即加熱至160~170℃維持1~2h。
干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品,液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法滅菌。
滅菌前的準(zhǔn)備:
玻璃器皿等在滅菌前必須經(jīng)正確包裹和加塞,以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內(nèi);三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙,用棉繩以活結(jié)扎緊,以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心,輕輕捅入管口,松緊必須適中,管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過(guò)火焰燒去,滅菌時(shí)將吸管裝入金屬管筒內(nèi)進(jìn)行滅菌,也可用紙條斜著從吸管包起,逐步向上卷,頭端的紙卷捏扁并擰幾下,再將包好的吸管集中滅菌。
干燥箱滅菌:
將包扎好的物品放入干燥烘箱內(nèi),注意不要擺放太密,以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內(nèi)層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160~170℃并恒溫1~2h,注意勿使溫度過(guò)高,超過(guò)170℃,器皿外包裹的紙張、棉花會(huì)被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿,溫度為120℃持續(xù)30分鐘即可。溫度降至60~70℃時(shí)方可打開箱門,取出物品,否則玻璃器皿會(huì)因驟冷而爆裂。
用此法滅菌時(shí),絕不能用油、蠟紙包扎物品。
火焰滅菌:
直接用火焰灼燒滅菌,迅速*。對(duì)于接種環(huán),接種針或其它金屬用具,可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進(jìn)行滅菌。此外,在接種過(guò)程中,試管或三角瓶口,也采用通過(guò)火焰而達(dá)到滅菌的目的。
結(jié)果:
記錄各種不同物品所用的滅菌方法及滅菌條件(溫度、壓力等)。
試述高壓蒸汽滅菌的過(guò)程及注意事項(xiàng)。
注:以上資料僅供參考!
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