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BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白濃度的原理及特點
本生闡述:BCA 蛋白濃度測定試劑盒原理:
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量試劑盒是在世界上常用的蛋白濃度檢測方法之一BCA法基礎上改進而成。,二價銅離子在堿性的條件下,可以被蛋白質還原成一價銅離子(biuret reaction),一價銅離子的BCA Solution A(含有BCA)相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的BCA螯合一個銅離子,形成紫色的反應復合物。該水溶性的復合物在562nm處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系,因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。
BCA 蛋白濃度測定試劑盒的特點:
1.步驟簡單,45分鐘內完成測定,比經典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2.靈敏度高,檢測濃度下限達到25μg/ml,最小檢測蛋白量達到0.5μg,待測樣品體積為1-20μl 。
3.BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學物質的影響,可以兼容樣品中高達5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween-20, 60, 80。
4.在20-2000μg/ml濃度范圍內有良好的線性關系。
5. 檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍法蛋白定量。
注意事項:
1.長期不用時,Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,如發(fā)現細菌污染則應丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現結晶沉淀時,可37℃溫育使其溶解, 不影響使用。
2.樣品中若含有較多干擾物質時,請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4. 常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100,Tween不影響檢測結果,但受螯合劑(EDTA, EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中,若發(fā)現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用考馬斯亮藍(Bradford)蛋白濃度測定試劑盒。
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