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本生快訊:Elisa試劑盒實驗的技巧及注意事項
在操作elisa試劑盒實驗前,不少老師會找尋很多的相關(guān)實驗資料,網(wǎng)上的資料一大堆,然而真正所能夠需要用到的技巧和注意也就那幾條,熟練的了解并掌握之后再應(yīng)用到實驗中就會簡單的多。
一、加樣的經(jīng)驗總結(jié)
加樣或加試劑時,請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時,個孔與一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間控制 在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
二、孵育的三條必知
1.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo) 板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);
2.洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);
3.同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
三、ELISA洗滌小技巧
洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直 接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響*后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
四、反應(yīng)時間的控制
加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔 10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
五、操作說明
1.封板膜只做一次性使用。
2.標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高時先將樣本稀釋一定倍數(shù)后再測定,計算時請乘以稀釋倍數(shù)。
3.各步加樣均使用加樣器,并經(jīng)常校對其正確性,一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)(標(biāo)本數(shù)目多的時候,上海研域推薦使用排槍加樣)。
4.液體標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,-20℃不應(yīng)超過1個月,-80℃不應(yīng)超過2個月;標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
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